两全其美：确保色谱分离和质谱检测在蛋白质定量方面的完美合作

通过稳定同位素标记肽作为校准物和选定的反应监测实验对蛋白质进行绝对定量，已成为标准蛋白质[1,2]、复杂基质中蛋白质[3]或翻译后修饰[4]定量的常用方法。然而，确保可追溯性，或将“物质绝对量”固定到国际单位制（SI），以及蛋白质定量的稳健性，仍然是一项复杂的任务。

本文描述了当必须以最小的不确定性对蛋白质进行可追踪定量时，需要优化的消化步骤以及色谱和质谱条件。将举例说明优化色谱和质谱条件有助于提高使用稳定同位素标记肽作为标准的蛋白质绝对定量的总体置信度。将讨论一些色谱柱的性能和临界质谱参数，如峰值和扫描时间的点数，以及它们对比值测量的影响，因此也将讨论测量不确定度。

简介

基于液相色谱-质谱（LC-MS）的蛋白质组学已发展成为支持分子和细胞生物学的重要工具。同时改进LCMS技术平台和生物信息

工具极大地促进了生物标记物发现和细胞表达谱分析稳健方法的发展，对临床、环境和

营养应用。。