十八烷基硅烷(C18)可能是HPLC中最常用的表面改性剂。它是最稳定和高度疏水的。反相色谱中流动相的有机组成可以微调与固定相的疏水相互作用的影响。在许多分离情况下,这是一种非常有效的分离混合物质的方法。


许多物质,如肽和较小的蛋白质,具有高级的三级结构,由相对较弱的非共价内部结合相互作用维持。反相高效液相色谱中可能出现的高浓度有机溶剂可能会干扰这些相互作用,并可能损害蛋白质的生物活性。通常,这是一个可逆的过程,但可能需要额外的步骤来恢复结构。为了避免这种情况,可能需要能够在接近或完全含水的条件下进行净化。


最近,Kromasil引入了一种可湿性C18相,用于在水条件下生产规模纯化极性物质(如生物分子)和分析HPLC应用。名义上,可湿相仍然是C18相。这样的阶段怎么可能是“可润湿的”?


在常规C18相上,如果逐渐应用100%的水条件,只要系统中保持高压,流动相可以与固定相保持良好的接触。在这种情况下,压力迫使流动相存在于固定相的孔隙中,尽管疏水表面存在废除力。如果压力下降(即流量减少或停止时),液体将从孔隙中排出,从而大大减少固定相和流动相之间的相互作用表面。对于色谱特性,这意味着样品组分的选择性和系数严重损失。然而,通过切换回正常相条件,可以恢复色谱柱中的表面可用性,但实际的色谱运行可能被视为被破坏。


为了使固定相在全水条件下可润湿(避免如上所述的脱湿),在表面引入极性组分,如混合模式相。一些已在曲面修改器的根处添加极性组。Kromasil可湿相具有极性嵌入端盖。与市场上的其他相关净化相相比,这也使得该相在酸性条件下具有更好的化学稳定性。


有关本文说明的色谱条件的更多详细信息,以及了解有关此阶段的更多信息:根据田中测试集的属性、示例和当前可用性,请访问 Kromasil网站 .