如何改进柱色谱的分离？

分离是色谱法的主要目的，所以你想改进它来进行分析是可以理解的。幸运的是，有几种方法可以做到这一点，尽管它们也常常有缺点。在这篇文章中，我们将讨论一些改进柱色谱分离的方法，以及您需要考虑的缺点…

增加列长度

第一个选项是增加列长度。这可以提高已经开发的方法的分辨率。作为安捷伦强调，分辨率大约等于长度与直径的平方根的四分之一。

换句话说，色谱柱长度与分辨率、色谱柱效率以及分离能力成正比。然而，柱长度的任何增加都必须通过流速的增加来反映，以避免更长的分析时间。如果是这样的话，增加色谱柱长度和流速会导致更高的背压——这说明了获得正确平衡的重要性。

增加板号

当使用列进行分隔时，可以通过提高列的效率来改进分隔。这是通过增加板数实现的，板数是柱效率的理论测量值，与柱长度密切相关，如上所述。

简单地说，理论上是每个柱由几个板或阶段组成，分析物通过这些板或阶段。每个板都为分析物和固定相之间的反应提供了机会，这意味着板数较高的色谱柱效率更高。

计算板数的公式包括成比例的保留时间和成反比的峰宽。因此，增加保留时间可以改善分离，而增加峰宽则有害。

当然，这两个步骤并不是那么简单。通过增加柱长增加保留时间意味着更长的分离时间，这对于大规模分析来说并不理想。另一方面，减少峰值宽度说起来容易做起来难。它由分辨率决定，分辨率本身取决于一系列因素，如色谱柱长度、体积和温度。

使用较小的粒子

最后，还有小颗粒的使用。粒径是指用于填充色谱柱的颗粒的直径。5-10微米的颗粒是常规分析的标准颗粒，尽管3微米甚至小于2微米的更小填料已成为一种选择。

研究发现，较小的颗粒尺寸可以在不影响流速或运行时间的情况下改善分离。然而，它确实如此以背压为代价这意味着，为了使颗粒更小，设备必须能够在更高的压力下运行。或者，也可以使用较短的柱长度，尽管这本身会降低效率并抵消较小颗粒的好处。

同样值得考虑粒径如何影响分散的影响。正如文章中所强调的，色谱柱的效率越高，分散体积越大可能产生负面影响分散对快速色谱分离的实际影响 .