聚(dT)寡核苷酸是单链核苷酸链,仅由胸腺嘧啶作为碱基组成。由于胸腺嘧啶和腺嘌呤的碱基配对,聚(dT)寡核苷酸能够捕获聚腺苷信使RNA(mRNA)。这种机制广泛用于mRNA提取和纯化,例如在互补DNA(cDNA)合成或mRNA疫苗制造过程中。因此,对高纯度寡核苷酸的需求至关重要。


对于寡核苷酸的分析,离子对反相(IP-RP)高效液相色谱(HPLC)是最常用的方法。IP-RP依赖于分析物和离子对试剂之间的离子相互作用。离子对试剂的亲脂烷基链与固定相具有很高的亲和力,可最大限度地将分析物保留在固定相上。由于IP-RP色谱的高分辨率,可以分离出只有最小尺寸差异的寡核苷酸。


与2个专用寡核苷酸柱的比较

在这个技术说明将YMC-Triart Bio C18柱与XBridge寡核苷酸BEH C18和DNAPac柱进行了比较,这两种柱据称是专门设计用于分离寡核苷酸的。这个 YMC-Triart生物C18与XBridge寡核苷酸BEH C18和DNAPac RP柱相比,该柱显示了聚(dT)寡核苷酸的更好的分辨率、更高的回收率和再现性(图2和3)。


更好的分辨率、回收率和再现性

XBridge寡核苷酸BEH C18对较长的聚(dT)寡核苷酸(60–120个)的分离效果较差,而YMC-Triart对所有大小的寡核苷酸都显示出高分辨率(图2)。当使用DNAPac RP柱分离时,较短的聚(dT)寡核苷酸(10–40mer)的面积和回收率要小得多。例如,DNAPac RP分析的15mer峰面积仅为YMC-Triart Bio C18分离时检测到的峰面积的43%。此外,YMC-Triart Bio C18显示出可重复的行为,例如即使在六次注射后仍具有一致的峰面积(图3)。相反,DNAPac RP仅在三次注射后,峰面积显著下降。这使得YMC-Triart C18成为分析聚(dT)寡核苷酸的理想工具。


聚(dT)寡核苷酸的理想选择

YMC-Triart Bio C18色谱柱是聚(dT)寡核苷酸的理想选择,因为:


所有大小的寡核苷酸的高分辨率

较短寡核苷酸的回收率较高

一致且可重复的分离性能

可选生物惰性硬件选项可用