在色谱法中,响应因子被定义为被分析化合物的浓度与检测器对该化合物的响应之间的比率。色谱图将检测器的响应显示为峰值。虽然有几种方法可以量化峰值,但最常见的方法之一是峰面积,因此:


Response Factor = Peak Area / Concentration

重要的是要记住,气相色谱(GC)系统和分析方法的变化可能是响应因子偏差的原因。


定量分析

定量分析是测定样品(分析物)中化合物的浓度。当使用GC进行定量分析时,响应因子很重要。因此,为了样品测量的再现性,必须使用消除响应系数变化的方法。消除响应因子变化的最简单方法之一是使用相对响应因子和内部标准来校准GC。


相对响应系数(RRF)

然后使用为每个分析物计算的响应系数来建立两个分析物之间的RRF,从而:


Relative Response Factor (RRF) = Response Factor A / Response Factor B

RRF可用于计算已知浓度分析物B存在时分析物A的未知浓度,使用以下方程式:


Concentration A = Peak area A /峰值面积Bx 1个/ 注册退休基金x浓度B

当其中一个样品是内部标准品时,使用RRF是有益的——校准后允许对不同样品进行多次分析。关于RRF如何用于涉及GC的药物研发的讨论,可以在Rome和McIntyre(2013)中找到。


内部标准

内标物(IS)是一种在物理和化学特性上与所分析样品相似的化合物。它必须对样品不起作用,不得与样品或用于稀释或制备GC的任何溶剂发生反应。


定量分析步骤

为了确定样品中两种化合物A和B的比例,首先必须校准GC。校准完成后,可对样品进行分析,并测定未知样品中A和B的浓度。简化程序为:


1) 制备校准样品,其中应包含已知浓度的化合物a和B。添加已知量的IS。校准和分析样品中应使用相同浓度的IS。


2) 将校准样品引入GC。由于A、B和IS的浓度已知,因此可以使用结果计算A和B相对于IS的RRF,从而:


注册退休基金A类= Response factorA类/响应系数是

注册退休基金B类= Response factorB类/响应系数是

3) 配制未知和已知浓度的IS样品,并注入GC。分析后,所需结果为A、B和IS的峰面积。


4) 一个简单的计算可以计算出未知物质中A和B的浓度。


a.让RRFA类= 1.13 from step 2


b.然后使用响应系数和RRF方程:


注册退休基金A类= 1.13 = Response factorA类/响应系数是

注册退休基金A类= (Peak Area A / Conc. A) / (Peak Area IS / Conc. IS)

c.A的浓度可以通过重新排列此方程来确定:


Conc. A = Peak Area A x (Conc. IS / Peak Area IS) x (1 / 1.13)

d.由于我们知道A和IS的峰面积(从步骤3),以及使用的IS浓度,我们可以计算A的浓度。


e.类似计算得出B的浓度。