使用生物惰性柱对寡核苷酸进行HILIC分析

寡核苷酸在医学应用中变得越来越重要，目前它们被用于治疗多种疾病。因此，需要稳健和高灵敏度的分析方法。离子对反相液相色谱法（IP-RP）和阴离子交换色谱法（AEX）似乎是寡核苷酸及其副产物表征的金标准。除AEX外，由于寡核苷酸的高度极性，亲水作用液相色谱（HILIC）也可以提供一种替代方法。传统上用于管和柱硬件的材料对寡核苷酸的分析提出了特殊挑战。

不锈钢标准柱的局限性

尽管甲醇或乙腈等许多洗脱剂可能会引起腐蚀，但不锈钢具有机械弹性，并与大多数溶剂相容。由此产生的带正电表面可能导致金属浸出以及与分析物的不希望的离子相互作用。富含电子的分析物作为寡核苷酸可以被不可逆地吸附。这种非特异性吸附对回收率和峰形状有负面影响。当在低至中性pH值下工作时，这种影响更为关键，因为金属在这些条件下具有更高的电正性。

生物惰性柱提供了一个强大而简单的解决方案

为了克服这个问题，可以用强酸钝化HPLC系统和色谱柱，或者用类似的样品进行预处理。然而，这些程序很耗时，需要重复应用。此外，样品的变化会再次导致非特异性吸附。一个更强大和简单的解决方案是使用生物惰性系统和色谱柱硬件。具体来说，需要注意色谱柱硬件，因为它代表分析物接触表面的70%以上。因此，生物惰性柱体和熔块将显著提高性能。因此，雅马哈提供了 生物惰性YMC-Acura Triart在柱体和熔块上有生物惰性涂层的一系列柱。

在一个新的申请说明使用YMC-Triart Diol HILIC柱和传统不锈钢硬件以及生物惰性柱选项YMC-Accura Triart Diol-HILIC柱，分析了三种不同的寡核苷酸混合物（dT15-35和dT40-100脱氧胸苷寡核苷酸和rU15-30 RNA寡核苷酸）。比较表明，使用生物惰性涂层色谱柱可以获得更高的峰面积、更高的强度和更少的尾矿。

预调节显著减少

预处理是处理不锈钢柱的典型程序。使用生物惰性柱，如 YMC-Accura Triart公司通常在第一次注入时就获得了很好的性能，至少在使用IP-RP阶段时是这样。然而，即使使用生物惰性柱，HILIC相仍需要一些预处理。图1显示了达到完全调节前所需的短DNA寡核苷酸注射次数。尽管这些生物惰性柱仍需要调节，但注射次数显著减少。虽然不锈钢色谱柱需要20次进样，但YMC-Accura色谱柱在8次进样后已经进行了调节，初始峰面积和最终峰面积之间的差异很小（小于10%）。