水溶性和脂溶性维生素的HPLC-DAD分析

介绍

高效液相色谱法（HPLC）是维生素分析过程中使用的标准常规方法。维生素在结构、生物活性和化学性质上是多种多样的化合物，对正常的代谢功能至关重要。它们天然存在于许多食品中，但也经常添加到加工食品和药物中。此外，在饮食受到限制的人群中，维生素补充剂是一种日益增长的趋势。维生素分为两组；水溶性和脂溶性。最常见的水溶性维生素补充剂是硫胺（B one)，吡哆醇（B six)、氰钴胺（B twelve)、核黄素（B two )、烟酸（B three)烟酰胺、抗坏血酸葡萄糖苷、维生素C和赤藓酸。最常见的脂溶性维生素是视黄醇（维生素A）、视黄醇醋酸酯（维生素A醋酸酯）、麦角钙化醇（维生素D two)、胆钙化醇（D three )、dl-α-生育酚（维生素E）、dl-β-生育醇醋酸酯（维生素E醋酸酯）和叶醌（K） one ).

由于目标分析物的不稳定性，维生素的常规分析可能具有挑战性。许多因素都会影响维生素的稳定性，例如暴露在热、光和空气中以及与其他食物成分的相互作用。利用反相高压液相色谱法（HPLC）和二极管阵列检测（DAD），很容易建立水溶性和脂溶性维生素的两种定性检测方法。对于定量分析，建议使用单独的HPLC方法，因为各种维生素不稳定，在样品制备过程中会定期分解。

本文详细介绍了HPLC-DAD对水溶性维生素和脂溶性维生素的分析。

实验

SCION 6000 HPLC和DAD配备有5µm C18反相柱，用于同时鉴定9种目标水溶性化合物。在四丁基铵中制备0.1mg/L至50mg/L范围内的分析标准品。用于维生素B的分析 one和维生素B six，使用盐酸盐。所分析的样本之一是营养补充剂样本。样品稀释为1:10，然后通过0.45µm过滤器过滤。水溶性维生素和脂溶性维生素的分析条件见表1。

对于脂溶性维生素的分析，使用相同的SCION HPLC-DAD同时分析七种目标分析物。利用DAD选择多个波长的能力，可以识别三个不同波长的所有七种目标分析物。使用不同波长至关重要，因为脂溶性维生素通常以不同的浓度存在（主要目标维生素和其他维生素的微量水平）。

分析标准品的制备范围为0.01mg/L至10mg/L（维生素a）、0.1mg/L至100mg/L（醋酸维生素a、维生素D） two，维生素D three和维生素K one维生素E和维生素E醋酸盐的校准范围为1mg/L至1000mg/L。甲醇用作稀释溶剂。其中一份样品包括富含维生素的药物眼药水样品。在通过0.2µm过滤器之前，所有样品均采用1:10甲醇稀释液制备。

结果

为了确保良好的线性，维生素C、赤藓酸和维生素B twelve由于洗脱液中维生素的不稳定性，必须每天准备。上述维生素的线性为0.996或更高。图1显示了维生素B的线性 six这是其余目标化合物的代表，所有目标化合物的线性值均为1。

图2显示了5mg/L水溶性分析标准品的色谱图。

如图2所示，所有维生素都呈现出极佳的峰形，且分离良好。图3显示了营养补充剂样品的色谱图。

营养补充剂样品含有四种必需的水溶性维生素；维生素B one、烟酰胺、维生素C和维生素B two使用Compass CDS软件，通过吸收光谱比较确认目标化合物的鉴定。将样品分析物的吸收光谱与分析标准中相同化合物的吸收光谱进行比较，从而提高结果的可信度。

脂溶性维生素对所有七种目标化合物都表现出良好的线性关系，R two值0.9999或更大。如良好的线性所示，在SCION HPLC-Dad上可以分析较宽的浓度范围，而无需进行困难的样品制备或方法调整，即使目标化合物不稳定。图4显示了使用三种不同波长的分析标准的色谱图。

图5详细说明了富含维生素的药物滴眼液样品的色谱图以及维生素A的吸光度比较光谱（标准溶液和样品）。

与水溶性维生素一样，通过吸光度光谱比较，使用Compass CDS对确定的样品分析物和分析标准成分进行比较。滴眼液样品中确定的两种成分是维生素A和维生素E醋酸盐。

结论

使用带二极管阵列检测器的SCION HPLC，可以轻松实现同时鉴定九种水溶性维生素和七种脂溶性维生素的两种不同分析。由于维生素的不稳定性，样品制备是这些应用过程中必须考虑的关键因素；尤其是维生素C和赤藓酸。利用二极管阵列检测器的多波长功能，可以在三种不同波长上同时识别不同浓度范围的脂溶性维生素。这消除了对大量样品制备或多种分析方法的需要。所有15种目标化合物均具有良好的线性。Compass CDS软件可以方便地比较吸光度光谱，以便在鉴定中进行确认。