保留时间（RT）是指分析物在进样和检测之间在色谱柱上花费的时间。时间取决于许多因素，必须对这些因素进行控制，以提供一致的保留时间。化合物的保留时间可用于定性和定量分析中的化合物鉴定。因此，系统将化合物连接到保留时间的能力非常重要。


RT变化引起的问题

RT变化可能会导致几个问题：


如果样品中含有许多峰，则很难将化合物与峰进行匹配，尤其是当峰接近时。

如果RT比通常稍长，则在运行结束之前可能无法检测到峰值。

如果峰超出预期范围，则可能与不同的峰组相关，从而导致不正确的分析。

什么是可接受的变化？

RT中总会有一些小的变化，在方法开发过程中应该考虑哪些可接受的变化。


开发过程的一部分应该考虑方法的稳健性——事实上，这是包括制药在内的许多行业的监管要求。在方法开发阶段，应考虑可能导致RT变化的因素，并对变化集进行限制。本文讨论了在方法开发过程中测试影响RT的各种因素：有机和无机流动相中分析物保留率的相关性，以帮助液相色谱法的发展 .


如果没有设定变化限制，可以使用一些经验法则。两个例子是：


对每个RT变化使用固定时间，例如±0.02分钟。

使用百分比差值余量，例如方法中时间的±10%。

如果对RT有任何疑问，可以使用参考样品来确认色谱和仪器参数是否正确。


相对保留时间

一种有助于降低RT变化引起的不确定度的方法是使用相对保留时间（RRT）。使用RRT，将内标物（IS）添加到样品中，并将每个分析物的保留时间与IS保留时间进行比较。


欧洲委员会发布的监管指南中使用了RRT分析方法结果的解释动物体内的残留物。该指南规定：


分析物的色谱保留时间与内标物的色谱保持时间之比，即分析物的相对保留时间，应与校准溶液的相对保留期相对应，GC的公差为±0,5%，LC的公差为？,5% .


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