反相高效液相色谱法(HPLC)之所以有这个名字,是因为正如你所料,该过程的顺序是颠倒的。而在正常HPLC中,物质的非极性部分在固定相中分离,从而随后洗脱极性部分,而在反向HPLC中,首先减去极性部分。这是通过在固定相中使用亲脂性基团来实现的,而不是在常规HPLC中使用亲水性基团。


这本质上意味着,反向高效液相色谱可以在固定相中使用水或水基溶剂。在常规HPLC中,二氧化硅是最常用的物质,虽然它确实具有选择性优势,但它也会吸水,这可能导致结果和保留时间出现偏差。


反向HPLC的优点是什么?

通过使用水(或水基物质)作为溶剂,反向高效液相色谱消除了由于大气中吸收水而导致分析物保留时间偏移的危险。此外,不同的疏水性溶剂(通常用于正相HPLC)具有不同的压缩反应,这使得准确的梯度分离变得更加困难。由于每个紫外线截止点的不同,这也变得更加困难。


使用反相高效液相色谱法,通过使用更通用的水基溶剂简化了问题。此外,使用普通高效液相色谱法解决上述问题的传统方法是使用比二氧化硅更有机的溶剂;然而,这往往需要花费更多的钱来在程序完成后进行处理。因此,反相高效液相色谱法不仅变得更简单,而且也更具成本效益。


然而,尽管方便和经济是该过程的两个优点,但反向高效液相色谱的主要优点在于其灵活性。由于它具有疏水性固定相,因此可以与疏水性(即非极性)、亲水性(即极性),离子性和离子性化合物结合使用,以分离出它们的各种成分,具体取决于使用的程序。很简单,在使用反相高效液相色谱时,选择哪种固定相比使用普通高效液相色谱仪的选择范围要大得多。


文章高效液相色谱法发展的艺术死了吗?对反相高效液相色谱的优点进行了更深入的研究,并对具有十年行业经验的人的高效液相色谱仪方法发展前景进行了全面坦率的展望。


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