你如何准备柱色谱法？

俗话说“不准备，就准备失败”。对于柱层析来说，这当然是正确的，因为制备是至关重要的。在这篇文章中，我们将介绍准备柱色谱时涉及的一些主要步骤…

列选择

柱色谱制备的第一步是选择合适的色谱柱。首先，这需要与所讨论的分析类型相匹配，例如正相、反相、离子交换或尺寸排除，所有这些都有专门设计的色谱柱。

然后是维度。长度和直径你的专栏文章会影响分析结果。简而言之，更长和更窄的色谱柱将减少所需的样本量，增加分析时间，进而提高分辨率。然而，它们确实需要更大的压力，因此立柱需要能够承受。

包装材料

下一步是你们的包装材料，它为色谱分析提供了固定相。这些可能在两个主要方面有所不同——材料和尺寸。从材质开始，最流行的选项包括：

二氧化硅–适用于具有高极性表面的传统应用

氧化铝–同样具有高极性表面，适用于酸敏感化合物

二醇–适用于具有低极性表面的脂质

氨基-具有中等极性表面，适合碳水化合物

另一个变量是粒子的大小。长期以来，5µm是标准尺寸。随后，3.5µm成为了一种流行的选择，接下来是近年来更小的颗粒，例如3µm、2µm或更小的颗粒。简单地说，较小的颗粒可以提高效率，而不会增加流速、色谱柱长度或分析运行时间，尽管它们确实会增加背压。

样品制备

另一个至关重要的步骤是准备样品，为流动阶段做好准备。这包括去除分析物或基质成分。没有正确的样品制备，分析结果就不够好。

样品制备可以是物理制备，即在不进行化学改变的情况下对样品进行清洗、浓缩或分馏。或者，它们可以是化学物质，样品经过改良以对其进行分馏或提高可检测性。

一些常用方法包括：

固相萃取

微波样品制备

流动注射分析

分段流量分析

柱色谱的其他制剂

除上述要点外，柱色谱还有其他制备步骤，如梯度优化，稳健性研究和方法改进。这些都有助于确保方法与所选仪器兼容。

幸运的是，正如本文中所讨论的，有一些方法可以使它们更容易地使用自动化“使用两种不同仪器对染发剂混合物进行自动HPLC方法开发和稳健性测试” .