在表征和研究每种对映体的药理作用时，对映体比率的测定是必不可少的。FDA要求对手性药物分子进行单独测试，因为历史表明，体内对映体之间的行为可能会发生重大差异。一些对映体只是效力不同，但其他对映体可能相互抑制，甚至有些对映体有害。20世纪50年代，沙利度胺的一种对映体被用于治疗晨吐，然而，另一种对聚体会导致出生缺陷[1]。结核病可以用多种药物治疗，包括乙胺丁醇（S，S）-（）对映体，但（R，R）-（-）对映物会导致失明[2]。
目前，确定对映体纯度需要实现对映体基线分辨率的耗时任务。这通常需要在各种分离条件下使用许多色谱柱和溶剂组合进行SFC筛选。所得条件适用于这些特定对映体的分离，而其他外消旋混合物需要新的溶剂-柱筛网。
圆二色检测器（CD）测量左右圆偏振光的差分吸收。虽然对映体对紫外线的吸收是一样的，但它们对左右循环偏振光的吸收是不同的。测量对映体之间差异吸收的能力将允许在不解析峰的情况下测定对映体比率，从而消除实现对映体分离的耗时过程。
Advil®是一种非常常见的消炎药，其活性成分布洛芬为外消旋形式，而Seractil®是对映体纯形式。Floxin®是一类抗生素，用于治疗各种细菌感染，其活性成份氧氟沙星为外消长。左旋喹啉®是该药物的对映体纯形式。Actron是另一种消炎药，含有外消旋活性成分酮洛芬。珊瑚是对映体的纯形式。这些药物的结构如表1所示。这些药物的对映体纯度的测定势在必行，因为它们是许多商用药物中的一种，以外消旋和对映体纯形式作为完全不同的药物提供。为了满足FDA对手性药物生产的要求，有必要确认正在生产的手性药物的正确形式，并且必须分析对映体纯度。
实验
试验化合物樟脑磺酸D、樟脑磺酸L、樟脑硫酸DL、左氧氟沙星、氧氟沙辛、（S）-（）-布洛芬、（S。HPLC级水和HPLC级乙腈购自Sigma-Aldrich（美国密苏里州圣路易斯）。C18（2.1 x 50mm，1.9um）柱购自Restek（美国宾夕法尼亚州Belleforte）。
Jasco UHPLC由四元泵、自动采样器和圆二色检测器组成，由ChromNAV 2软件控制。每个样品的浓度为1.0mg/mL，注射体积为1uL，流速为0.5mL/min。每个化合物的CD波长不同，并在结果和讨论部分列出了每个化合物的波长。
结果和讨论
图1显示了樟脑磺酸D、樟脑磺酸L和樟脑磺酸DL的重叠CD光谱。樟磺酸D和樟磺酸L对CD检测器发出的圆偏振光表现出相等和相反的差分吸收，最大吸收波长约为287nm。外消旋樟脑磺酸DL在光谱扫描和色谱图中没有显示信号，因为等量的D和L对映体抵消了它们各自的吸收。287 nm处的重叠色谱图如图2所示。3种化合物的紫外信号与预期几乎相同，但CD色谱图显示了在不分解对映体的情况下测定对映体过量的能力。
樟脑磺酸是一种理想的化合物，可用于演示圆二色性的原理和操作，然而，为了证明其适用于对映体测定，而无需对活性药物分子进行拆分，Advil中的活性成分 ® 、Seractil ®、演员、Keral、Floxin ®和利瓦金 ®进行了分析。图3显示了225nm酮洛芬的色谱图，将外消旋混合物与其对映体纯对应物进行了比较。295 nm处的氧氟沙星和左氧氟沙辛以及260 nm处的布洛芬产生了类似的结果（未显示）。在所有三个示例中，外消旋混合物没有显示CD吸收，而对映体纯化合物（S）-（）-酮洛芬和左氧氟沙星显示负CD吸收，（S）/（）-布洛芬显示正CD吸收。CD吸收的缺乏证明了混合物确实是外消旋的，因为对映体的CD吸收相等且相反，相互抵消。
由于对映体过量测定通常用于确定通常为95%或更高的对映体纯度，图4显示了95%、96%、97%、98%和99%（S）-（）-酮洛芬的重叠。图5显示了95-100%（S）-（）-酮洛芬的相关系数0.99。
结论
CD检测表明，当其他检测方法（如UV）无法区分对映体时，它能够区分对映异构体。当结合快速洗脱和分离超高效液相色谱时，这种能力可以在不分解对映体的情况下提供对映体过量测定。这种应用也可以应用于外消旋研究，为那些快速外消旋的手性分子提供非常短的时间间隔。
1.C.布莱克莫尔和S.詹尼特。牛津大学身体指南。牛津大学出版社。2001
2.N.Chhabra、M.Aseri和D.Padmanabhan。药物异构性及其意义综述。国际期刊申请。2013年基础医学研究。3 (1). 16-18.
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